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本发明公开了一种烃源岩中含氧类脂物柱色层分离装置及方法，涉及油气勘探技术领域，分离装置包括控制组件和调节组件，控制组件下端与色谱柱固定连接，控制组件包括上调节板、中调节板和下调节板，上调节板上开设多个通孔，下调节板上开设多个与通孔对应的流通孔，中调节板一侧开设调节孔，中调节板与上调节板转动连接，控制组件通过齿轮啮合结构实现调节孔连通其中一个通孔以及对应的流通孔；调节组件设置在色谱柱下方，调节组件通过齿轮齿条结构带动移动板移动；支架上连接多个烧杯；分离方法应用于上述分离装置，通过多种不同极性洗脱剂与有机溶剂反应，将不同的含氧类脂物精细分离以便测定分析。